在荷蘭格羅寧根大學(xué)的Martien Kas實(shí)驗(yàn)室工作的貝蒂·霍尼克斯（Betty Hornix），通過(guò)這篇文章向大家非常詳細(xì)地描述了如何使用動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)（EthoVision XT）進(jìn)行視頻跟蹤設(shè)置并執(zhí)行小鼠嗅覺(jué)測(cè)試。
嗅覺(jué)和行為
人與動(dòng)物之間的相互作用取決于適當(dāng)?shù)男嵊X(jué)處理，當(dāng)這個(gè)過(guò)程出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，可能會(huì)影響正常的社交行為（Hornix等人，2018）。
正確分析嗅覺(jué)對(duì)于準(zhǔn)確解釋小鼠各種行為至關(guān)重要，尤其是觀(guān)察社交行為。下面我們將描述如何進(jìn)行嗅覺(jué)習(xí)慣/去嗅覺(jué)習(xí)慣測(cè)試。我們將解釋如何DIY自己的測(cè)試籠，哪些準(zhǔn)備工作是必要的，如何執(zhí)行測(cè)試，以及如何使用動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)（EthoVision XT）分析視頻。
嗅覺(jué)習(xí)慣測(cè)試
嗅覺(jué)習(xí)慣/去嗅覺(jué)習(xí)慣測(cè)試（OHDT）評(píng)估動(dòng)物是否能夠檢測(cè)和區(qū)分不同的氣味。它由不同氣味的連續(xù)呈現(xiàn)組成。我們使用了一系列的水、兩種非社會(huì)性氣味和兩種社會(huì)性氣味。
每種氣味在持續(xù)2分鐘的三次連續(xù)試驗(yàn)中呈現(xiàn)給動(dòng)物（見(jiàn)以下時(shí)間表）。在這三次試驗(yàn)中，氣味的嗅覺(jué)調(diào)查減少被定義為習(xí)慣化。當(dāng)出現(xiàn)一種新的氣味時(shí)，動(dòng)物發(fā)現(xiàn)嗅覺(jué)增加時(shí)，會(huì)表現(xiàn)出一種被稱(chēng)為去嗅覺(jué)習(xí)慣的整體行為。
最少的試驗(yàn)操作
這里描述的方法，即嗅覺(jué)習(xí)慣/去嗅覺(jué)習(xí)慣測(cè)試，因?yàn)榛\子內(nèi)部不受干擾，所以涉及較少試驗(yàn)操作（Yang&Crawley，2009和Oumadi等人，2019）。由于氣味刺激物（500 ul試管內(nèi)的用棉花密封）不會(huì)接觸籠子或籠子蓋的任何部分，因此避免了交叉試驗(yàn)污染。
如何制作自己的測(cè)試籠
該測(cè)試可以在需要進(jìn)行一些小調(diào)整的普通家庭籠中執(zhí)行。每天測(cè)試的每只動(dòng)物都使用一個(gè)單獨(dú)的籠子，可以避免氣味留在籠子里。
我們?cè)诨\子的短邊燒了一個(gè)洞，用一個(gè)釘子在小錫罐上打了個(gè)洞。小錫罐用熱膠粘在每個(gè)籠子燒過(guò)的洞里（見(jiàn)下圖）。我們建議不要使用硅膠膠，因?yàn)闅馕逗苤?，希望盡量減少分散注意力的氣味。
氣味將通過(guò)這個(gè)錫罐呈現(xiàn)給動(dòng)物。這樣，在測(cè)試過(guò)程中，保持籠子內(nèi)部不會(huì)受到干擾。
測(cè)試前的必要準(zhǔn)備
測(cè)試連續(xù)兩天進(jìn)行。第一天，動(dòng)物適應(yīng)了籠子，并準(zhǔn)備好了氣味管。此外，清潔籠子，并填充了小墊層。我們使用了一種非常溫和的清潔劑來(lái)減少籠子里的氣味。
適應(yīng)和測(cè)試
動(dòng)物適應(yīng)試驗(yàn)籠
我們使用了500 ul的試管，通過(guò)錫罐向動(dòng)物呈現(xiàn)氣味。每只動(dòng)物需要準(zhǔn)備17根管子，管子的一端切掉（見(jiàn)下圖）。其中兩個(gè)試管中充滿(mǎn)了干棉簽。在準(zhǔn)備測(cè)試和執(zhí)行的每一步中都必須戴手套，盡可能防止氣味轉(zhuǎn)移。
下午，每只動(dòng)物都要適應(yīng)測(cè)試籠30分鐘，同時(shí)將一根帶有干棉簽的管子插入錫罐中。
嗅覺(jué)刺激的準(zhǔn)備
測(cè)試當(dāng)天上午，氣味管準(zhǔn)備就緒。我們使用了水、杏仁提取物、橙子提取物、幼年糞便、成年糞便。之所以選擇杏仁和橙子提取物，是因?yàn)樗鼈儦馕斗?span style="font-family: 宋體; font-size: 16px; color: rgb(0, 0, 0);">常特別，但氣味中性。
我們按照測(cè)試的順序（蒸餾水>杏仁（1:15）>橙子（1:5）>社會(huì)氣味1>社會(huì)氣味2）在水中和試管中準(zhǔn)備稀釋液，在不同氣味之間記得更換手套，不要觸摸棉簽的棉端（見(jiàn)上圖）。不要混合氣味是非常重要的！這是一項(xiàng)非常耗時(shí)的任務(wù)，所以要花足夠的時(shí)間來(lái)準(zhǔn)備一切。
執(zhí)行測(cè)試
該測(cè)試總共需要49分鐘，包括在開(kāi)始時(shí)用一根新管握住一根干棉簽進(jìn)行5分鐘的馴化。氣味一次出現(xiàn)3次，每次持續(xù)2分鐘，ITI為1分鐘，總共15次試驗(yàn)（見(jiàn)上述時(shí)間表）。我們使用多視頻錄制軟件（Media Recorder）從測(cè)試臺(tái)上方錄制視頻。
動(dòng)物可以自由探索試驗(yàn)籠。在準(zhǔn)備氣味時(shí)以及在動(dòng)物變化之間需要非常小心（通過(guò)不斷更換手套），以避免轉(zhuǎn)移和混合氣味。
多只動(dòng)物可以在它們自己的測(cè)試籠中同時(shí)進(jìn)行測(cè)試，只要注意準(zhǔn)確呈現(xiàn)氣味的時(shí)間，以便使用EthoVision XT 16成功進(jìn)行自動(dòng)分析。
使用動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)（EthoVision XT）分析視頻
在動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)（EthoVision XT）中，當(dāng)動(dòng)物的鼻尖位于我們?cè)?/span>3.5厘米錫罐周?chē)鷶?shù)字標(biāo)記的區(qū)域內(nèi)時(shí)，我們測(cè)量了嗅氣味所花費(fèi)的時(shí)間。
數(shù)據(jù)的提取和可視化
數(shù)據(jù)以1分鐘的時(shí)間段導(dǎo)出，并將每次試驗(yàn)的2分鐘持續(xù)時(shí)間相加。我們通過(guò)繪制15次試驗(yàn)中嗅氣味的時(shí)間來(lái)可視化結(jié)果。在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，習(xí)慣和去習(xí)慣對(duì)非社會(huì)性氣味和第一種社會(huì)性氣味都非常有效。這是顯而易見(jiàn)的，因?yàn)樵?/span>3次試驗(yàn)中，每種氣味的嗅聞時(shí)間都有所減少。
此外，當(dāng)氣味變?yōu)樾職馕稌r(shí)，嗅聞時(shí)間會(huì)增加。此外，這些動(dòng)物能夠以類(lèi)似的方式區(qū)分第一種社交氣味和最后一種非社交氣味。他們更難區(qū)分這兩種社交氣味。我們建議使用特別的社交氣味，例如不同品種或更大年齡差異的氣味。
嗅覺(jué)的有效測(cè)試和自動(dòng)化
總之，嗅覺(jué)習(xí)慣/去嗅覺(jué)習(xí)慣測(cè)試對(duì)于測(cè)試嗅覺(jué)功能和分離嗅覺(jué)行為中的不同特征非常有效。此外，這種方法使動(dòng)物在測(cè)試過(guò)程中不受干擾，減少了動(dòng)物壓力，使用動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)（EthoVision XT）自動(dòng)化分析成為可能。
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